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　　通过对课题组近年来分离得到的化合物进行活性筛选，发现高圣草素具有良好的细胞氧化损伤保护作用泽泻醇B23乙酸酯具有显著地肺癌细胞增殖抑制活性，对这两种天然产物展开了较为深入的活性研究。氧化应激是导致血管内皮细胞损伤进而引发多种血管疾病，如动脉粥样硬化、慢性肾病等的主要因素。氧化应激的产生是由于细胞内抗氧化防御系统和氧化因素如活性氧ROS之间的失衡所致。应对氧化应激引起的氧化损伤的有效方法之一是启动细胞内源性抗氧化系统。核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件NRF2/ARE信号通路是机体应对氧化应激的第一道防线，激活该信号通路可以帮助细胞重建内源性抗氧化系统，维持稳定的氧化还原平衡。NRF2是细胞维持内源性氧化还原平衡的主要转录因子。氧化应激条件下，NRF2进入细胞核与其靶基因启动端抗氧化反应元件（ANTIOXIDANTRESPONSEELEMENT,ARE）结合，启动Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶的表达，从而提高细胞抗氧化损伤能力，为细胞提供深层次、长久地保护作用。有研究表明，激活NRF2/ARE信号通路可以有效的预防或改善氧化因素导致的多种血管疾病。发现NRF2激动剂，通过启动NRF2/ARE信号通路以提高血管内皮细胞的抗氧化损伤能力，预防氧化应激引起的内皮细胞损伤或功能异常，有望成为防治心脑血管疾病的有效方法。高圣草素是课题组从槲寄生中分离得到的一种二氢黄酮类化合物。高圣草素是一种抗氧化剂，具有体外自由基清除活性。本论文研究了高圣草素对过氧化氢H2O2引起的人脐静脉内皮EAHY926细胞氧化损伤的保护作用及对NRF2信号通路的激动作用。MTT和细胞实时生长检测RTCA结果表明，高圣草素对H2O2引起的EAHY926细胞增殖抑制表现出剂量依赖性保护作用。DAPI染色和ANNEXINⅤ/PI双染结果表明，高圣草素可以抵抗H2O2引起的EAHY926细胞凋亡。免疫荧光、WESTERNBLOT、REALTIMERTPCR、蛋白半衰期检测等结果表明，高圣草素能够诱导NRF2进入细胞核、诱导NRF2、NQO1和ΓGCS蛋白水平和MRNA水平提高、延长NRF2蛋白的半衰期。进一步研究表明，高圣草素能够增加细胞内还原型谷胱甘肽的含量、降低H2O2导致的胞内ROS聚集、调节凋亡相关蛋白的表达水平。通过NRF2小分子干扰RNANRF2SIRNA沉默EAHY926细胞中NRF2基因表达，MTT、RTCA、WESTERNBLOT等方法检测，结果表明高圣草素保护作用消失，提示高圣草素的抗氧化损伤作用是通过调节NRF2信号通路。综上所述，高圣草素是一种天然的NRF2激动剂，可以通过激活NRF2/ARE信号通路保护EAHY926细胞H2O2引起的线粒体介导的凋亡。恶性肿瘤成为当今世界威胁人类健康、导致死亡的首要原因之一。其中肺癌因发病率和死亡率高而备受关注。随着全球肺癌的发病率和死亡率地逐年增加，急需开发有效的化疗药物来延长肺癌患者的生命周期。泽泻醇B23乙酸酯是课题组从建泽泻中分离得到的四环三萜类化合物。采用MTT法检测了四个结构类似的四环三萜化合物，泽泻醇AA1、泽泻醇A23乙酸酯A2、泽泻醇OA3和泽泻醇B23乙酸酯A4对两种肺癌细胞增殖活性的影响。结果表明泽泻醇AA1和泽泻醇B23乙酸酯A4对A549和NCIH292两种肺癌细胞株表现出较明显的增殖抑制活性。选择了获得量大、活性更好的泽泻醇B23乙酸酯为目标化合物，开展了进一步研究。DAPI染色和ANNEXINⅤ/PI双染结果表明A4能够诱导肺癌细胞凋亡。进一步研究发现，化合物A4可诱导细胞内ROS聚集、降低线细胞周期无明显影响。采用WESTERNBLOT、免疫荧光等方法检测发现，A4能够促进促凋亡蛋白BAX表达、抑制抗凋亡蛋白BCL2和BCLXL表达、促使细胞色素C从线粒体释放，进而激活CASPASE9、CASPASE3和PARP等的级联反应，最终导致肺癌细胞的凋亡。A4还可促使凋亡诱导因子AIF从线粒体释放并转入细胞核，引发细胞核的凋亡。综上所述，A4通过启动线粒体介导的内源性凋亡途径使A549和NCIH292细胞发生凋亡，表明A4有望成为治疗肺癌的先导化合物。